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人转录激活因子4(ATF4)酶联免疫分析

发表时间:2024-06-11

人转录激活因子4(ATF4)酶联免疫分析

 

 

试剂盒使用说明书

 

本试剂盒仅供研究使用。

 

检测范围:                                                            96T

22pg/ml-800pg/ml

 

使用目的:

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中转录激活因子 4(ATF4)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人转录激活因子 4(ATF4)水平。用纯化的人转录 激活因子 4(ATF4)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入转录激活 因子 4(ATF4) ,再与 HRP 标记的转录激活因子 4(ATF4)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体 复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸 的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的转录激活因子 4(ATF4)呈正相关。用酶 标仪在 450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人转录激活因子 4(ATF4) 浓度。

试剂盒组成

 

1

30 倍浓缩洗涤液

20ml×1 

7

终止液

6ml×1 

2

酶标试剂

6ml×1 

8

标准品(1600pg/ml

0.5ml×1

3

酶标包被板

12 ×8 

9

标准品稀释液

1.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1 

10

说明书

1 

5

显色剂 A 

6ml×1 

11

封板膜

2 

6

显色剂 B 

6ml×1/

12

密封袋

1 

标本要求

1 .标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1.     标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

800pg/ml

5 号标准品

150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

400pg/ml

4 号标准品

150μl  5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

200pg/ml

3 号标准品

150μl  4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

100pg/ml

2 号标准品

150μl  3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

50pg/ml

1 号标准品

150μl  2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液


2.     加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加          样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl, 然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.     温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.     配液:将 30 倍(48T 的 20 倍)浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍(48T 的 20 倍)稀释后备用

5.     洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。

6.     加酶:每孔加入酶标试剂 50μl ,空白孔除外。

7.     温育:操作同 3。

8.     洗涤:操作同 5。

9.     显色:每孔先加入显色剂 A50μl ,再加入显色剂 B50μl ,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10 分钟.

10.   终止:每孔加终止液 50μl ,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.   测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标



准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。

注意事项

1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。

2 .浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3 .各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4 . 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值 大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计 算时请最后乘以总稀释倍数 ( ×n×5)。

5 . 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6 .底物请避光保存。

7 .严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8 .所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9 .本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1 .试剂盒保存:;2-8℃。

2 .有效期:6 个月

联系方式
手机:13576007671
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